石斛论文：铁皮石斛组培快繁关键技术研究概述

石斛论文：铁皮石斛组培快繁关键技术研究概述高剑平，孙莉娜

邱小明：漳州职业技术学院张 梁：江南大学生物工程学院   铁皮石斛又名黑节草，是兰科石斛属多年生草本植物，为传统名贵中药，在《神农本草经》中被列为上品，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、润喉明目、延年益寿之功效，被称为中华九大“救命仙草”之首。现代医学研究证实，铁皮石斛含有石斛碱、石斛次碱等生物碱及石斛菲和多糖等成分，具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力、降低血糖和抗血小板聚集等作用。   

然而，铁皮石斛生长对环境要求苛刻，自然条件下萌发率极低，加上其具有极高的药用与经济价值，人们长期无节制的采挖，致使野生铁皮石斛资源愈来愈稀少，种源已临枯竭，被列为濒危种。为实现铁皮石斛资源的可持续利用，多年来国内外不少机构对铁皮石斛人工栽培技术进行了研究，尤其是进入2 1世纪，我国研究人员在铁皮石斛组培快繁技术方面的研究取得了一定的进展。现将近年来有关铁皮石斛组培快繁的关键技术研究概况总结如下。

1  原球茎增殖最佳培养基研究由种胚产生的原球茎，实际上是缩短的芽，其繁殖速度是丛芽增殖方式的几十倍。因此，石斛原球茎增殖是铁皮石斛组织培养过程中一个十分关键的环节，通过诱导石斛产生原球茎，可为之后的分化、壮苗生根奠定基础。培养基中不同激素浓度配比是促进原球茎增殖的重要影响因素，不少学者通过试验报道了原球茎增殖最佳培养基配比，如陈兆贵等以ＭＳ为基本培养基，附加ＮＡＡ、6－ＢＡ和ＫＴ进行激素配比试验，结果认为最佳培养基配比为ＭＳ＋ＮＡＡ1.0mg/L＋6－ＢＡ1.0mg/L＋ＫＴ1.0mg/L，接种35d后原球茎增殖倍数达5倍；徐雪荣等以引自云南的铁皮石斛原球茎为原料，在增殖培养基中添加4％白糖，并通过添加不同浓度、不同组合的激素进行配比试验，研究认为最佳培养基配比为ＭＳ＋6－ＢＡ0.75mg/L＋ＮＡＡ0.2mg/L＋4％白糖，接种35d后原球茎增殖倍数为4.19。由于是单因素试验，不同学者得到的结论存在差异。2　原球茎分化最佳培养基研究原球茎进行分化可形成丛生芽，不同培养基对石斛原球茎分化整齐度、健壮度、分化率影响不一。

郑宽瑜等研究表明：低浓度ＮＡＡ与高浓度ＢＡ混用效果好，分化率高，具3～4片叶的分化苗占80％以上，且分化整齐。斯金平等也认为，一定浓度范围的生长素和细胞分裂素组合能促进原球茎的形成和芽的分化。仲磊等研究表明，添加椰汁能够促进铁皮石斛苗原球茎分化较多丛生芽且长势较好。陈兆贵等口1研究了不同激素浓度配比对原球茎分化的影响，认为以MS为基本培养基，较为理想的激素浓度配比为6 - BA 2.O~3．Omg/L、NAA O.5～1.O mg/L、KT 1.Omg/L。

为研究不同因素对石斛原球茎分化的影响，邵世光等利用正交试验法，以采自浙江雁荡山山区铁皮石斛种子培养得到的原球茎为原料进行试验，得到影响原球茎分化程度的因素依次为IBA浓度>6 - BA浓度>pH值。3  丛生苗生根壮苗最佳培养基研究铁皮石斛丛生苗生根培养研究方面，白美发等研究发现，N6对铁皮石斛幼苗增殖效果最好；日光灯照射下的铁皮石斛苗高；自然光照下培养的铁皮石斛苗粗壮，叶色浓绿，增殖率高。

邵世光等利用6 - BA、IBA、pH和培养基种类、琼脂浓度、KC1浓度各3因素4水平进行L9(34)正交试验，得到铁皮石斛组培丛生苗生根的最优配方是N6+KC1 2.5mol/L+琼脂4g/L；影响诱导生根的主要因素是KC1，其次足琼脂浓度，最后是基本培养基种类。在天然添加物影响研究方面，斯金平等认为，单独添加香蕉汁、苹果汁均能促进铁皮石斛试管苗生根与生长，但培养前期苹果汁好于香蕉汁，后期香蕉汁好于苹果汁，添加苹果汁25g/L+香蕉汁75g/L有利于壮苗培养。在赤霉素处理对幼叶成苗的影响方面，蒋向辉等研究表明，在一定范围内随着赤霉素浓度的增加，幼茎成苗率呈现先上升后下降的趋势，而愈伤组织的诱导率逐渐上升，适宜的赤霉素浓度(1.5mg/L)能够促进幼叶直接成苗。许传俊等认为，这可能是由于赤霉素通过影响生长素合成和运输、乙烯合成和反应，从而促进根的形成和细胞的生长。

4培养基改良研究目前，在铁皮石斛培养中以MS、1/2MS、改良MS（NH4N03减少50%，其余和MS相同）以及B气培养基使用最多。郑志仁等和陈芝华等认为，使用MS培养基在种子萌发率和丛生芽增殖方面比其他培养基要高。朱艳等认为1/2MS培养基用于诱导丛生芽效果较好。莫昭展等研究表明，改良MS培养基有利于铁皮石斛原球茎的增殖。在壮苗培养方面，Bs培养基则表现较好。

5  结语综上所述，近年来我国科技人员对铁皮有斛组培快繁技术研究主要集中在培养基优化、不同激素配比对外植体生长的影响等领域，取得了一定的进展，为铁皮石斛大规模人工栽培在种苗供应方面提供了技术保障。