论文：石斛多糖的提取方法优化实验

论文：石斛多糖的提取方法优化实验　　

1  材料与仪器　　

葡萄糖、苯酚、硫酸、乙醇、石油醚，均为分析纯试剂（成都科龙化工）。马鞭石斛（采自四川夹江，并经中国科学院成都生物研究所何涛副研究员鉴定），60 ℃下烘干并过40目筛。TU-1800S紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器）；RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器）；HH-S数显恒温水浴锅（江苏金坛医疗仪器）；T214分析天平（北京赛多利斯仪器）；KQ-5200超声波发生装置（昆山超声仪器）；6202植物粉碎机（北京环亚天元机械）；AYJ1-1002-U艾柯浦纯水仪（重庆颐洋企业发展有限公司）。　　

2  方法　　

2.1  超声波辅助热回流提取流程　　

马鞭石斛→60℃干燥→粉碎过40目筛→称取石斛干粉→石油醚回流去脂→80%乙醇回流去低聚糖→超声波辅助热回流提取→紫外分光光度计检测吸光度。　　

2.2  标准曲线的制备　　

对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品0.025 0 g，加水溶解，250 ml容量瓶定容，即得0.1 mg·ml-1的葡萄糖对照品液。　　

标准曲线的制备：精密量取上述对照品液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于具塞试管中，分别加水至2.0 ml，各加入5%苯酚溶液1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0  ml，摇匀，放置10 min，置40 ℃水浴保温15 min，取出迅速冷却至室温，紫外分光光度计490 nm处测定吸光度，空白对照以2.0 ml蒸馏水代替葡萄糖液。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为：　　Y=0.068 6X-0.000 3（r=0.999）　　

式中Y——浓度（mg·ml-1）；X——吸光度值（A）多糖的提取率按下式计算：多糖的提取率（%）=浓度×稀释倍数×样品溶液体积样品质量×100%　　

2.3  单因素实验温度对多糖提取的影响　　

分别考察40，50，60，70，80 ，90 ℃对多糖提取率的影响。时间对多糖提取的影响主要考察4 ，8，12，16，20，24，28 min 7个水平；以筛选的最佳温度和提取时间考察超声波提取次数（1，2，3，4次）对马鞭石斛多糖提取的影响。　　

2.4  提取工艺正交实验设计在单因素实验基础上，对提取温度、提取时间和提取次数进行L9（34）正交实验，筛选最优提取工艺。对筛选出来的最优提取工艺进行精密度、重复性、稳定性等方法学考察，同时将其与传统热回流工艺的提取效率进行比较。　　

3  结果　　

实验建立了利用超声波辅助热回流技术提取马鞭石斛多糖的方法。通过正交设计对提取温度、时间以及提取次数进行优化，结果表明提取次数对马鞭石斛多糖提取具有显着的影响，优水平为A3B2C3，即温度为95 ℃，时间为16 min，提取4次。经方法学考察，本方法具有良好的精密度和稳定性，且重复性好。　　

与传统热回流法相比，超声波辅助热回流技术最大的优点就是提取时间短、效率高，大大节省了生产能耗，这一点也可以从我们的实验结果中得到佐证。分析原因，可能正是由于超声波的机械效应、空化效应和热效应，增大了介质分子的运动速度和介质的穿透力，从而更好的提高了有效成分的提取效率。目前利用超声波技术提取天然产物时，通常未结合加热处理，直接利用超声波自身产生的热效应来增大提取率，但超声波的热效应毕竟是瞬时的，对于提取率的增加效应较弱