论文：不同品种石斛的4种提取部位指纹性特征研究_石斛论文

论文：不同品种石斛的4种提取部位指纹性特征研究

石斛为常用名贵药材，野生资源濒临灭绝，家种石斛规模较小，满足不了临床和新药开发的需要；而且民间药用石斛品种较复杂和繁多，它们能否替代药典品种入药，是迫切需要解决的问题。因此，本实验拟采用紫外-可见分光光度法（二阶导数法）测定不同品种石斛的4种提取部位指纹性特征图谱，并判断不同品种石斛药材的亲缘性及其近似程度，以期能寻找到石斛新的药用资源，为科学、合理和正确使用该类药材提供实验数据。　　

1  仪器与试药　　UV760CRT紫外分光光度仪（上海分析仪器厂），KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），水（重蒸水），其它试剂均为分析纯。石斛药材收集于云南、四川夹江等地，药材均经刘圆教授、彭朝忠副教授鉴定。药材来源见表1。　　

2  方法与结果　　

2.1  样品溶液的制备将石斛药材样品在45 ℃烘干2 h，粉碎过60目筛，分别精密称取药材粉末0.250 g，置于50 ml具塞锥形瓶中，精密加入20 ml石油醚，超声处理1 h ，过滤，用石油醚洗涤滤渣，合并滤液，定容至50 ml，作为样品溶液；挥去样品残留的石油醚，精密加入20 ml氯仿，超声处理1h ，过滤，用氯仿洗涤滤渣，合并滤液，定容至50 ml，作为样品溶液；95 %乙醇、水组样品制法同上。石油醚、氯仿测定原液稀释10倍，95 %乙醇提取液稀释20倍，水提取液稀释10倍（使吸收度A<1或接近1），在这样的吸光度范围内，峰的最大吸收波长基本不随浓度变化而变化，以对应的溶剂为参比溶液进行紫外指纹图谱测定［5］。　　

2.2  最佳提取方法和时间的确定实验结果表明，采用超声提取法，石油醚、氯仿、95 %乙醇和水的提取物在1 h均可达到最大且稳定的提取率。稳定性实验实验结果表明，4种溶剂提取液保存在0～4℃在24 h内均保持稳定。 重复性实验在相同条件下，平行测定3份石油醚提取物的紫外指纹图谱具有良好的重复性，共有峰率大于89 %。　　

2.3  不同种石斛的指纹图谱及数据叠鞘石斛、鼓锤石斛、金钗石斛和马鞭石斛各个部位指纹特征图谱分别见图1～4；数据见表2～3。表2 不同种石斛药材的石油醚、氯仿、95 %乙醇和水提取液指纹图谱共有峰的识别结果，　　

2.4  不同种石斛药材不同溶剂提取物共有峰率和变异峰率双指标序列分析结果利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法［5～9］对不同品种石斛药材的4种提取物进行相似性研究和分析。从表3可得出，4个品种石斛药材样品中，S1（叠鞘石斛）和S3（金钗石斛）的相似度为33.3%；S1（叠鞘石斛）和S4（马鞭石斛）的相似度为36.2%；S2（鼓锤石斛）和S3（金钗石斛）的相似度为35.8%；S2（鼓锤石斛）和S4（马鞭石斛）两者的相似度为42.3%。　　

从本实验结果来看，利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法对不同种石斛药材的石油醚、氯仿、95 %乙醇和水等4种提取物进行分析，其4个部位的相似度均比较低。根据生物亲缘关系越近，生物中所含的成分越相似这个理论，在生物大类成分相近似程度的角度来判定两种同科同属植物的亲缘相近似程度，可以为两种药材是否能替代使用提供科学依据