铁皮石斛组培快繁技术的研究[论文]

 
 

图版说明：1.2枚未成熟的铁皮石斛蒴果。经表面消毒后，取蒴果中的未成熟种子作为外植体。 2.未成熟种子经过60d培养后，获得大量的原球茎体，其中大部分已萌发出1～2片真叶。3．原球茎体经60d壮苗培养后，获得的铁皮石斛增殖苗。4．在含有10%香胶泥的生根培养基上培养了50d生根苗。5．洗净了培养基准备炼苗移栽的铁皮石斛组培苗。6． 7．铁皮石斛组培苗移栽后约12个月时的生长发育状况。

Explain of Plate：1.Two immature capsales of Dendrobium offciecinale,the immature seeds in the capsules were used as the explants in this experiment after the surface sterile. 2. Lots of protocom-like bodies were obtained from the immature seeds after a 60-d culture. Most of which formed 1～2 true leaves. 3. The proliferated plantlets of D. offciecinale, obtained from the protocom-like bodies after a 60-d culture. 4. The rooting plantlets of D. offciecinale cultured for 50d on the rooting medium with 10% banana jam. 5. Some vessel plantlets of D. offciecinale. The medium sticked of the base plant of the plantlets was cleanly washed away for transplantation. 6 and 7. The growth stuations of the plants of D. offciecinale,about 12-month old after the transplantation.

王先花[1,2] 陈 云[1, 2] 张发坤[1,] 李娟玲 [2] 刘国民[2]

(1. 琼中宝元堂南药种植有限公司,海南，琼中,570203;

2.海南大学苦丁茶研究所,海南,海口 570228)

摘要：以铁皮石斛的未成熟种子作为外植体，成功地建立了无菌材料，研究了不同浓度的椰子水（CW）、马铃薯泥和NAA等影响因子对铁皮石斛增殖培养的影响。在1/2 MS培养基中附加10 % （V/V） CW和0.1mg/L NAA，可获得非常理想的原球茎增殖效果，增殖系数高达145.28。铁皮石斛组培苗在壮苗培养阶段对外源IBA ，NAA和IAA的浓度变化均不敏感，从0.00 mg/L到2.50 mg/L，植株的长势长相差异不明显。其中IBA浓度为0.75 mg/L，NAA浓度为0.5 mg/L时，植株的长势相对要好一些，而且个体之间相对较均匀。在附加10 % （W/V）香蕉泥和1.0 mg/L NAA的 1/2 MS培养基上，铁皮石斛无菌苗可获得理想的生根壮苗效果。

关键词：铁皮石斛; 原球茎; 组培快繁

Study on the In-vitro Rapid Propagation of

Dendrobium offcicinale Kimura et Migo

Wang Xian-hua, Cheng Yun, Zhang Fa-kun Li Juan-ling, Liu Guo-min

( 1.Qiongzhong Baoyuantang Southern Medicinal Herbs Plantation Company, Ltd. Qiongzhong, Hainan, China570203;

2. The Kudingcha Research Institute of Hainan University. Haikou, Hainan, China 570228)

Abstract The immature seeds of Dendrobium offcicinale Kimura et Migo were successfully used as explants to establish sterile materials. The factors, including coconut water (CW), potato puree and NAA (all with different concentrations) were systematically studied. The best effect for multiplication of protocom-like body could be obtained on the medium was 1/2 MS+10 % CW+ 0.1 mg/L NAA and the multiplication coefficient was as high as 145.28. The sterile plantlets were insensitive to the changes of the concentrations of exogenous auximone, such as IBA, NAA and IAA. During the stage of plantlet-promoting culture, the growth performances of the plantlets were scarcely distinct while the concentrations range of the auximones mentioned above was from 0.00 mg/L to 2.50 mg/L. However, the growth performance of the plantlets were better under the conditions in which the concentration of IBA was 0.75 mg/L, or the concentration of NAA was 0.5 mg/L, and the plantlet individuals were relatively even. The good rooting Medium was 1/2 MS complemented with 10% banana puree and 1.0 mg/L NAA.

Keywords Dendrobium offcicinale Kimura et Migo; protocom-like body; In-vitro Rapid Propagation

1 引言

铁皮石斛 (Dendrobium offcicinale Kimura et Migo )是我国传统名贵中药材，贵州黔西南州一带称黑节草[1]。铁皮石斛对热病伤阴、胃阴不足、慢性萎缩性胃炎等症有良好效果，在心脑疾患、防癌抗癌、防老抗衰等方面有良好的效果，其加工品“铁皮枫斗”在国际市场上每千克可达1300～3000美元[2,3]。由于铁皮石斛对生长环境要求苛刻，生长缓慢，产量低，繁殖系数小，自然更新能力差，再加上生态环境恶化，长期以来只采不种，以及过度的采挖等原因，已导致铁皮石斛野生资源几近枯竭，在原分布区内已很难找到野生植株[4～7]。铁皮石斛为多年生附生草本植物，是极其珍贵的中药材。由于铁皮石斛在自然条件下繁殖极为缓慢，分株繁殖或扦插繁殖等传统方法所能提供的种苗亦极为有限，故铁皮石斛的种苗供应远不能满足生产上的需要。为保护这一珍贵中药品种，前人已对铁皮石斛种子和茎尖离体培养技术进行了研究[8～11]，但大多数情况下试管苗增殖系数较低、试管苗的茎细小、细弱、移栽成活率不高，这种情况在一定成度上影响到铁皮石斛组培苗大规模工厂化生产的速度和生产成本。本课题在前人研究的基础上，以铁皮石斛的未成熟种子为外植体材料，研究了不同激素条件和不同种类与浓度的有机附加物对铁皮石斛原球茎增殖和试管苗生根壮苗等方面的影响，其研究结果可为铁皮石斛的工厂化育苗提供技术支撑。

2 材料与方法

2.1 材料

本研究中所用的实验材料系从云南省普洱市林科所铁皮石斛种植园内采回的8成熟蒴果(图版:1)。该种植园所种植的铁皮石斛其种源来自云南省文山州广南县境内的野生原种；“广南种”系我国石斛产业界公认的优良种质资源（图版：６，７）。所采回的蒴果材料经用植物组织培养的常规方法［10］进行表面消毒之后，取其中的未成熟种子作为外植体。

2.2 方法

2.2.1 材料的表面消毒及接种操作

将铁皮石斛的蒴果先用自来水冲洗干净，再置于５%洗洁精溶液中摇洗3次，每次摇洗５ｍin；取出蒴果用自来水洗净[15]，沥干水，然后在超净工作台上先用75 %酒精消毒3 min；倒去酒精，再用0.15 %升汞消毒15 ｍin；倒去升汞消毒液，用无菌水冲洗4 ～5次，沥干备用。接种时，在无菌的不锈钢盘上，将经过表面消毒的蒴果材料的各约0.5 cm切除并弃去，然后将中段沿纵轴切开，用无菌镊子夹住切开的蒴果材料，并用手术刀在培养瓶口上方将材料中的种子轻轻割下，均匀地接种到培养基表面上。

2.2.2 培养条件

培养室温度为（25±2）℃，以日光灯为光源，光照强度为2000～ 2500 lx，每天照光10 h (8:00～ 18:00)。

2.2.3 培养基配方

2.2.3.1 初代培养基配方（用于种子无菌萌发）

改良KC大量元素 + MS微量元素 + 肌醇100 mg/L（单位下同，略）+烟酸0.5 +盐酸硫胺素1.0 +盐酸吡哆素0.5 +甘氨酸2.0 + 20 % CW + 6-BA 0.1 + 2.0 % 蔗糖 + 0.7 %卡拉胶；pH 5.8。

2.2.3.2 不同浓度的有机附加物及NAA对铁皮石斛原球茎增殖培养的影响

培养基基本组分为：1/2 MS 无机盐+ 肌醇100 + 烟酸0.5 + 盐酸硫胺素1.0 +盐酸吡哆素0.5 + 甘氨酸2.0 + 2.5 % 蔗糖 + 0.8 % 卡拉胶 + 0.1 % 活性炭；pH 5.8。

各个处理中不同有机附加物和外源激素（NAA）的用量如表1所示。

表1 不同浓度的有机附加物和外源激素NAA用于原球茎增殖培养的实验设计

Table 1 An experimental design on the effect of different concentrations of organic compliments and

exogenous NAA on the proliferating culture of the protocorm-like bodies in Dendroobium officinale

处理编号 Codes of treatments	A	B	C	D	E	F	G	CK
有机附加物（%）和外源激素NAA的用量（mg/L）Concentrations of organic complements and exogenous NAA （mg/L）	5%CW + NAA0.1	10%CW + NAA0.1	15%CW + NAA0.1	20%CW + NAA0.1	25%CW + NAA0.1	10%CW +10%马铃薯泥	10%CW	不添加任何有机附加物或外源激素

注；每个处理接种15瓶，每瓶接种5个原球茎，培养90 d.

Note: 15 culture vessels were used for each treatment，and 5 protocorm-like bodies were inoculated into each vessel, cultured for 90 ds.

表2 不同种类和不同浓度的外源生长素用于铁皮石斛壮苗培养的实验设计

Table 2 An experimental design on the effect of different kinds and different concentrations of

exogenous auximone on the plantlet-invigorating culture of Dendrobium officinale

处理编号 Codes of treatments	外源生长素 种类与浓度 Kinds and concentrations of exogenous auximone（mg/L）	处理编号 Codes of treatments	外源生长素 种类与浓度 Kinds and concentrations of exogenous auximone（mg/L）	处理编号 Codes of treatments	外源生长素 种类与浓度 Kinds and concentrations of exogenous auximone（mg/L）
A-1 A-2 A-3 A-4 A-5 A-6 A-7 A-8	IBA0.25 IBA0.50 IBA0.75 IBA1.00 IBA1.25 IBA1.50 IBA2.00 IBA2.50	B-1 B-2 B-3 B-4 B-5 B-6 B-7 B-8	NAA0.25 NAA0.50 NAA0.75 NAA1.00 NAA1.25 NAA1.50 NAA2.00 NAA2.50	C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 C-7 C-8	IAA0.25 IAA0.50 IAA0.75 IAA1.00 IAA1.25 IAA1.50 IAA2.00 IAA2.50
CK	无外源生长素

2.2.3.3 壮苗培养基

以IBA,NAA及IAA作为供试的外源激素用于铁皮石斛的壮苗培养实验，供试的3种供试激素各设0.0，0.25, 0.50, 0.75, 1.00, 1.25, 1.50, 2.00和2.50 mg/L共9个处理，各种处理的编号和外源激素的种类与用量详见表2。

除外源激素不同之外，各个处理之培养基中的其他组分完相同，即培养基的基本组分为；

1/2 MS 无机盐+ 肌醇100 + 烟酸0.5 + 盐酸硫胺素1.0 +盐酸吡哆素0.5 + 甘氨酸2.0 + 2.0 %蔗糖 + 0.75 %卡拉胶 + 0.1 %活性炭；pH 5.8。

2.2.3.4 生根培养基

1/2 MS 无机盐+ 肌醇100 + 烟酸0.5 + 盐酸硫胺素1.0 +盐酸吡哆素0.5 + 甘氨酸2.0 + 2.0 % 蔗糖 + 0.75 % 卡拉胶 + 0.15 % 活性炭 + 10 % 香蕉泥 + NAA 1.0；pH 5.8。

3 结果与分析

3.1 铁皮石斛未成熟种子的萌发与无菌材料的建立

将铁皮石斛的未成熟种子接种在初代培养基上之后，经 15 d 左右的培养，即可在培养基表面观察到肉眼可见的浅绿色小团粒，直径0.5 mm ～1.5 mm 不等。这些浅绿色颗粒系未成熟种子经过 15 d 左右的离体培养所形成的原球茎体，或为少数原球茎体已萌发出子叶和第一片真叶而形成的无菌实生小苗。由于接种时未成熟种子未能完全地分散开来，故形成肉眼可见的直径为 1.0 mm ～2.5 mm 浅绿色球状颗粒。再经过20 d～25 d 的培养，大部分原球茎体已萌发，形成了具 1～2 片真叶的幼苗，同时也产生了一些新增殖的原球茎体。这些幼苗和原球茎体相互堆挤在一起，占满了初代培养基整个表层及表层之上约 1.5 cm 厚的空间(见图版I:4)。 此时铁皮石斛无菌材料的建立即告完成，应该及时将无菌实生小苗或原球茎体转接到新配制的增殖培养基或者生根壮苗培养基上进行培养

3.2 有机附加物和外源NAA对铁皮石斛原球茎体增殖的影响

在建立了铁皮石斛的无菌材料后，在 1/2 MS 培养基的基础上附加不同的浓度的椰子水（CW），10% 马铃薯等作为调控因子，研究了有机物和外源NAA对铁皮石斛原球茎体增殖的影响，试验结果如表3所示。

从表3可以看出，铁皮石斛的原球茎体具有较强的增殖能力。即使在空白处理中（CK，即不加椰子水，马铃薯等有机物或其他任何外源激素），经90 d 培养后，其增殖系数仍可高达47.46。但是，CW对于铁皮石斛原球茎的增殖具有非常显著的促进作用，在配合追加NAA 0.1 mg/L的条件下，CW的最佳浓度为10 %。在10 % CW + NAA 0.1处理中（即处理B），铁皮石斛原球茎体的增殖系数高达145.28。该处理中每瓶接入5个原球茎体，经90 d 培养后，其中最多的一瓶中增殖出的原球茎体数多达893个；统计５瓶，一共增殖出7264个原球茎体。而在只追加10% CW处理中（处理G）原球茎体的增殖系数为121.34。这表明，附加一定浓度的NAA对于原球茎体的增殖也有促进作用。在含有10 % CW的培养基中，加入10％的马铃薯泥之后（处理F），原球茎的增殖受到强烈的抑制，增殖系数降低到略低于（或等于）空白处理（CK）的水平，只有47.16（CK为47.46）。追加过多的CW同样抑制原球茎体的增殖，详见表３中处理C、D和E。

3.3 不同浓度和不同种类的外源生长素对铁皮石斛壮苗培养的影响

铁皮石斛未成熟种子经初代培养基培养后直接获得的无菌实生小苗，或者从原球茎体增殖培养过程中获得的新增殖形成的原球茎体经萌发后形成的组培小苗，由于个体太小，不宜将其直接转接到生根培养基上培养。应该经过一个壮苗培养阶段，使小苗进一步发育成长，形成比较健壮的植株之后，才可转入生根培养。为了研究不同浓度和不同种类的外源生长素对铁皮石斛组培苗壮苗培养的影响，设定了以1/2 MS为基本培养基，在有机物，糖浓度，卡拉胶以及pH等条件完全相同的条件下，以IBA, NAA和IAA作为供试的外源生长素种类，每种外源生长素设立0.25, 0.5 ,0.75, 1.00, 1.25, 1.50，2.00和2.50 mg/L等8个处理，以不加外源激素的处理作为对照（CK）。经过80 d培养后，3种供试外源生长素不同浓度梯度处理中铁皮石斛组培苗的生长发育情况如表4所示。

表3 不同浓度的有机附加物和外源NAA对铁皮石斛原球茎增殖培养的影响

Table 3 The effects of different concentrations of organic complements and exogenous NAA on the

proliferating culture of the protocorm-like bodies in Dendrobium offcinale

处理编号 Codes of treatments	有机附加物(%)和 外源NAA(mg/L)浓度Concentrations of organic complements(%) and that of exogenous NAA(mg/L)	接种的原球茎数(个) Numbers of protocorm-like bodies inoculated	增殖出的原球茎数(个) Numbers of protocorm-like bodies inoculated	增殖系数 Proliferating coefficients
A	5 %CW+NAA0.1	50	3023	60.46
B	10%CW+NAA0.1	50	7264	145.28
C	15%CW+NAA0.1	50	3385	67.70
D	20%CW+NAA0.1	50	2976	59.52
E	25%CW+NAA0.1	50	2918	58.36
F	10%CW+10%马铃薯泥	50	2358	47.16
G	10%CW	50	6067	121.34
CK	空白实验	50	2373	47.46

注：每瓶接种5个原球茎体，经90d培养后再统计(每个处理统计10瓶)。

Note: 5 protocorm-like bodies were inoculated in each culture vessel. The statistical figures in the table were gained when cultured for 90 d (in each treatment 10 culture vessels were counted up).

3.3.1 IBA处理组

IBA处理组即表2和表4中的A-1, A-2, A-3, A-4, A-5, A-6, A-7和A-8等8个处理，IBA的浓度依次分别为0.25, 0.5, 0.75, 1.00, 1.25, 1.50，2.00和2.50 mg/L，以空白实验为对照（CK）。

从总体上看，从CK到A-8，即从IBA浓度为0.00 mg/L到IBA浓度逐步递增至2.50 mg/L，植株在上势长相方面的差别不是很大。继代转接时，每瓶均是单株接入5株。经80 d壮苗培养后，每株苗增殖到3～4株，形成了一小丛，每丛发根8～9条，根长1.2～ 2.0 cm。根比较细小，直径1 mm左右。相对而言，A-3处理（IBA0.75 mg/L）的植株长势比较旺盛一些，而且比较均匀。各个处理的株高在3.5～4.5 cm，每株有叶片3～4片，叶片长度1.2～1.5 cm。可能是由于IBA浓度在8个处理中最高的缘故（2.50 mg/L），A-8处理中有少量植株基部形成有原球茎体，且已萌发出叶。

总之，在本实验的浓度范围内（0.00 mg/L～ 2.50 mg/L），铁皮石斛组培苗植株在株高，茎粗，叶数，叶片长度，根系发育等方面的长势长相均无明显差异。

3.3.2 NAA处理组

NAA处理组即表2和表4中的B-1, B-2, B-3, B-4, B-5, B-6, B-7和B-8等8个处理，NAA浓度

同样依次分别为0.25, 0.5, 0.75, 1.00, 1.25, 1.50，2.00和2.50 mg/L；同样地，以空白处理为对照（CK）。

NAA处理组的情况与IBA处理组的情况类似，即从CK到处理B-8，即从NAA浓度为0.00 mg/L到NAA2.50 mg/L，植株的长势长相均没有太大的区别。但相对而言，B-2处理，即NAA浓度为0.50 mg/L时，植株比较粗壮一些，也相对比较均匀。

类似于IBA处理组，各个浓度梯度中的组培植株均已发根；每瓶中分单株接入的5株苗，每株均增殖出2～3株丛生苗，即每瓶5丛，每丛3～4株不等。每丛芽发根8～10条，根长为1.5cm～2.0 cm。

3.3.3 IAA处理组

IAA处理组即表2和表4中的C-1, C-2, C-3, C-4, C-5, C-6, C-7和C-8等8个处理,IAA的浓度同样依次为0.25, 0.5, 0.75, 1.00, 1.25, 1.50，2.00和2.50 mg/L；同样地，以空白处理为对照（CK）。

IAA处理组的情况与IBA处理组及NAA处理组的情况类似，IAA浓度从0.00 mg/L到2.50 mg/L，

表4 不同种类和不同浓度的外源生长素对铁皮石斛试管苗壮苗培养的影响

Table 4 The effects of different kinds and concentrations of the exogenous auximone on

the plantlets-invigoration culture of Dendrobium officinale

处理编号 Codes of treatments	外源生长素 种类和浓度Kinds and concentrations of the exogenous auximone (mg/L)	各处理组及CK的培养效果 Culture effects in 3 treatment groups and CK
A-1	IBA 0.25	所接种的每个单株经80 d培养后，一般增殖到3.0~4.0株/丛，株高3.5~4.0 cm；每丛生根8~9条，根长1.2 cm~2.0 cm，根比较细，直径约1 mm。A-3在8个处理中植株的长势相对旺盛一些，且苗比较整齐均匀，株高一般有4.0~4.5 cm，每株有叶片3.5~4.0片。其余7个处理相互之间，以及与CK之间，植株的长势长相差异不甚明显。
A-2	IBA 0.50
A-3	IBA 0.75
A-4	IBA 1.00
A-5	IBA 1.25
A-6	IBA 1.50
A-7	IBA 2.00
A-8	IBA 2.50
B-1	NAA 0.25	长势长相情况类似于IBA处理组，即各个处理之间植株的长势长相差异不明显，相比较而言，B-2处理的植株较之组内其他各处理植株较旺盛一些，且相对均匀。各处理中植株的株高一般在4.0~4.5cm范围；所接种的每个单株发展到3~4株/丛；每丛发根8~9条，根长一般为1.5~2.0 cm，各处理中植株的生长发育状况与对照（CK）的差异不明显。
B-2	NAA 0.50
B-3	NAA 0.75
B-4	NAA 1.00
B-5	NAA 1.25
B-6	NAA 1.50
B-7	NAA 2.00
B-8	NAA 2.50
C-1	IAA 0.25	株高一般在3.5~4.5 cm范围内；转接时所接种的单株发展到3~4株/丛；每株有4~5片叶，最多的有6片叶，叶片长度为1.2~1.5 cm。该处理组内8个处理中植株的长势长相相互之间，以及与对照（CK）之间的差异不甚明显。与IBA处理组和NAA处理组内植株的生长发育状况亦大致相同。
C-2	IAA 0.50
C-3	IAA 0.75
C-4	IAA 1.00
C-5	IAA 1.25
C-6	IAA 1.50
C-7	IAA 2.00
C-8	IAA 2.50
CK	不添加任何外源激素	与追加有不同浓度的IBA,NAA及IAA各个处理在株高、叶数、叶色、根系发育及丛生苗数量等方面无明显差异。

植株的长势长相差别不是特别明显。各个处理的株高均在3.5～4.5 cm左右；转接时每瓶所接入5个单株，经过壮苗培养阶段后，每株各形成有2～3株新生的增殖苗。每株有叶4～5片，多者可达到6片叶。叶片的长度为1.2～1.5 cm不等。IAA处理组的8个处理中，植株的高度、茎粗，叶数等方面均没有太明显的差异。这表明，在壮苗培养阶段，在0.00 mg/L到2.50 mg/L浓度范围内，铁皮石斛对于IAA浓度变化的反应不敏感。

3.4 生根培养基的应用效果

将经过壮苗培养的铁皮石斛组培苗，在超净工作台上打开瓶盖，将每瓶中的所有培养物用无菌镊子全部转移到无菌的钢盘上，从中挑选出比较粗壮的无菌苗个体转接到新配制的生根培养基上。经过60 d生根培养，可以获得理想的发根和壮苗效果，植株高度可达4 cm～5 cm，每片叶长1.2 cm～1.5 cm，最长者可达2.5 cm，叶片最宽处达0.3 cm～0.5 cm（见图版: 4,5）。

生根壮苗培养基中加有NAA 1.0 mg/L以及10 %香蕉泥。在仅加入NAA 1.0 mg/L的处理中，例如本研究中在壮苗阶段的B-4处理（见表2；培养基的其他组分基本一样），发根和壮苗的效果远远不如同时加入10%香蕉泥和NAA 1.0 mg/L的处理。由此可见，10 %的香蕉泥对铁皮石斛的根系发育具有良好的促进作用。

4 结论

综合上述对本研究实验结果之分析，可得出以下主要结论：

① 以铁皮石斛的未成熟种子作为外植体，在培养条件适宜的情况下，可以高效地建立高质量的无菌材料。

② 铁皮石斛的原球茎体本身具有较强的增殖能力，在无任何外源激素或有机附加物的1/2 MS 培养基上，经90 d 培养，其增殖系数可达47.46。

③ 椰子水(CW) 对铁皮石斛原球茎的增殖有强烈的促进作用，其适宜的用量为10% (V/V) ；在附加有10 % CW的1/2 MS培养基上，原球茎的增殖系数可达121.34。

④ 低浓度的NAA(0.1 mg/L) 配合使用10 % CW可使 CW对铁皮石斛原球茎的增殖作用进一步加强，增殖系数由121.34上升为145.28。

⑤ 马铃薯泥对CW的促增殖作用有强烈的抵消效应。在附加有10 % CW的1/2 MS培养基中，再加入10%马铃薯泥后，可导致铁皮石斛原球茎体的增殖系数骤降为47.16, 甚至比空白处理的增殖系数（47.46）略低。

⑥ 用于铁皮石斛原球茎增殖培养的最佳培养基配方为：

1/2MS（无机盐） + 肌醇100 + 烟酸0.5 + 盐酸硫胺素1.0 +盐酸吡哆素0.5 + 甘氨酸 2.0 + NAA 0.1 + 10 % CW + 2.5 %是蔗糖 + 0.8% 卡拉胶 + 0.1 % 活性炭；pH 5.8。

⑦ 在壮苗培养阶段，铁皮石斛无菌苗对NAA， IBA及IAA等3种供试生长素类外源激素的浓度变化不敏感。当该3种激素的浓度变化范围为0.00 mg/L～2.50 mg/l时，各处理之植株的长势长相均无明显差异。

⑧ 10% 香蕉泥对铁皮石斛的根系发育具有良好的促进作用。单纯加入1.0 mg/L NAA的处理，其生根和壮苗的效果远远不如同时加入10% 和1.0 mg/L NAA的处理。

 

参考文献

[1] 陈瑞蕊，林先贵，施亚琴. 药用石斛及其组培技术研究概要[J].江苏农业科学，2002，（5）；65～66

[2] 张 明，夏鸿西. 张玉进,等. 石斛组培养研究进展[J]。中国中药杂志，2002,25{6}；323～326

[3] 唐桂香，黄福灯，周伟军. 铁皮石斛的种胚萌发及其离体繁殖研究[J], 中国中药杂志，2005，30(20):1583～1586.

[4] 朱 艳，秦民坚. 铁皮石斛茎段诱导丛生芽的研究[J]. 中国野生植物资源，2003，22(2):56～57.

[5] 蒋波，杨存亮，黄捷，等. 铁皮石斛原球茎生长分化及生根壮苗研究[J]. 玉林师范学院学报:自然科学版，2(X)5:26(3):66～69

[6] 蒋 林，丁 平，郑迎冬. 添加剂时铁皮石斛组织培养和快速繁殖的影响[J]. 中药材，2003.26(8):539～540.

[7] 周俊辉，钟雪锋，蔡丁稳. 铁皮石斛的组织培养与快速繁殖研究[J]. 仲恺农业技术学院学报，2005，18(1):23～26.

[8] 王 春. 石斛兰组织培养及快繁技术研究[J].浙江林业科技，20O2，2:38～40.

[9] 李小军，刘石泉，潘维陵，等. 香蕉提取物对霍山石斛试管苗壮苗的影响[J]. 江苏大学学报:自然科学版，2004，25(6):469～472.

[10] 张志良. 植物生理学实验指导[M].第2版.北京:高等教育出版社,1994.88～ 92,160～162

[11] 沈保安. 中国常用中草药石斛[M].合肥:安徽科学技术出版社,1992

[12] 李立安. 石斛组培技术的改进[J].植物杂志,1990,(2):30.

[13] 曾宋君,程式君. 石斛的试管苗快速繁殖,中药材,1996,19(10):490～491.

[14] 刘瑞驹,蒙爱东,邓锡青,等. 铁皮石斛试管苗快速繁殖的研究.药学学报,1988,23(8):636～640.

[15] 徐云鹃,于力文. 霍山石斛种子试管苗的培养.植物生理学通讯, 1984, 25(4):35.