论文：齿瓣石斛不同营养器官多糖的含量测定
论文：齿瓣石斛不同营养器官多糖的含量测定
作者：明兴加，王娟，王海军，李标，张明
【摘要】 目的探讨齿瓣石斛不同营养器官的多糖含量。方法采用硫酸－苯酚法对齿瓣石斛根、嫩条、叶、老条多糖含量进行测定。结果嫩条中的多糖含量明显高于其它部位，其含量的顺序分别为嫩条＞叶＞根＞老条。结论齿瓣石斛采收嫩条部位比较合理，老条可用于分株繁殖和压条繁殖。
【关键词】 齿瓣石斛； 多糖； 分析； 硫酸－苯酚法
Abstract：ObjectiveTo study the polysaccharide in different parts of Dendrobium devonianum Paxt..MethodsThe content of polysaccharide in root, tender stems, leaves, old stems of Dendrobium devonianum Paxt. were determined with sulfuric acid - phenol method. ResultsPolysaccharide content in tender stems was significantly higher than in other parts. The content in order was tender stems> leaves> roots> old stems.ConclusionIt is reasonable to harvest tender itenis fromDendrobium devonianum Paxt. stems, and the old stems can be used for reproduction ramets and layering propagation.
Key words：Dendrobium devonianum Paxt.; Polysaccharide; Analysis; Sulfuric acid - phenol method
兰科多年生草本植物齿瓣石斛Dendrobium devonianum Paxt.是强阴益精的重要中药，其产量高，用量大，农户种植热情高，发展速度快，且传统评价方法认为其品质较好，可与铁皮石斛媲美，值得进行深入研究和开发［1］。但是，由于齿瓣石斛开发较晚，有关其品质研究的文献报道较少，仅见郑志新等［2，3］对石斛类药材的研究中涉及齿瓣石斛多糖的含量测定。本文采用硫酸－苯酚法对齿瓣石斛不同营养器官中的多糖进行测定，旨在为人工采收和充分利用齿瓣石斛不同营养器官提供依据。
1 材料、仪器及试剂
1.1 材料齿瓣石斛材料来源于云南保山市龙陵县，经笔者鉴定为Dendrobium devonianum Paxt.。将材料分级，茎剪成小段，置于60 ℃条件下烘干至恒重。粉碎过筛后置于干燥条件下保存备用（嫩条为产区的通俗说法，即当年春天发芽，冬季落叶，且未开花的茎。老条为两年生以上的茎）。
1.2 仪器及试剂RE-201D型旋转蒸发仪上海予华有限公司；GL-26LM型离心机湖南星科科学仪器有限公司；UV－9100型紫光可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司；苯酚、石油醚、无水乙醇、浓硫酸、丙酮、葡萄糖等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 齿瓣石斛粗多糖的提取与制备精确称取干燥齿瓣石斛石斛粗品5.0 g，加入石油醚50 ml（60～90℃）回流脱脂2次，1 h/次；再用50 ml 80％乙醇回流提取1 h，以5 000 r/min离心5 min，弃去上清液，挥去溶剂，然后将沉淀物加75 ml蒸馏水于90℃水浴中浸提3次，1 h/次，过滤，合并滤液，浓缩至20 ml，加入0.1％活性炭脱色,离心，向滤液中加入无水乙醇使溶液含醇80％，静置过夜，过滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，于60℃烘干得齿瓣石斛粗多糖。
2.2 标准品溶液与供试品溶液的制备
2.2.1 标准品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100 mg，加水溶解并定容至100 ml，再取10 ml，定容于100 ml容量瓶中，得浓度为0.01 mg/ml的对照品贮备液。
2.2.2 供试品溶液的制备精密称取干燥粉末样品各0.25 g , 置于圆底烧瓶，用石油醚回流脱脂2次，1 h/次；加100 ml，80％乙醇回流提取1 h，以5 000 r/min的速度离心5 min，药渣用8 ml，80％乙醇洗涤3次，加蒸馏水85 ml，回流提取1 h，再用5 ml蒸馏水洗涤烧瓶和药渣多次，一并置于250 ml容量瓶中，稀释至刻度，得供试液，冰箱中放置备用。
2.3 标准曲线的制备精密量取标准液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 ml,分别置于试管中，加蒸馏水至2.0 ml，加5％苯酚试剂1 ml，摇匀，迅速滴加浓硫酸5 ml，摇匀，室温显色40 min。另取2 ml蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸，同法操作，作为空白对照。置于UV－9100型紫外可见分光光度计中，于490 nm处测定吸收度，以吸收度（Y）对葡萄糖含量（X）进行回归，得回归方程：Y=8.452 1 X+0.132，R2=0.999 5。结果表明葡萄糖在0.005 ～0.035 mg/ml范围内呈现良好的线性关系。
2.4 换算因素的测定精密称取干燥至恒重的齿瓣石斛多糖样品2.9 mg置于装有温水的烧杯中，用玻璃棒搅拌使其溶解，然后将其溶液转入250 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀作储备液。精密吸取此液0.3 ml，按标准曲线项下的方法测出吸收度，从回归方程中算出多糖供试液中葡萄糖的浓度。按下式计算换算因素：F=W/(C×D)。F为换算因素；W为粗多糖重量（mg）；C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度（mg/ml）；D为稀释因子。
2.5 精密度实验取供试液，按上述方法操作，连续测定6次，RSD＝0.37％。结果表明精密度良好。
2.6 稳定性实验取供试液，按上述方法操作，每隔30 min测定1次吸收度，连续4 h考察其稳定性。结果表明供试液在4 h显色稳定，RSD＝0.37％。
2.7 加样回收率实验精密称取鱼腥草样品0.25 g，加入适量葡萄糖对照品，置同一烧杯中，按供试液制备与含量测定法操作。测定结果葡萄糖的平均回收率为99.7％ ，RSD＝0.37％(n=6)。 2.8 样品含量测定取各供试品溶液，按“2.3”项下方法操作，测定吸收度，从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖含量：多糖含量（％）＝C×D×F×100/W。结果见表1。表1 不同营养器官多糖含量测定（略）
3 讨论
野生和人工栽培的齿瓣石斛嫩条多糖含量均较高，采收时以嫩条作为主要药用部位比较合理，老条可用于分株繁殖和压条繁殖。
叶片富含多糖，应充分利用。
人工栽培齿瓣石斛富含黏液，多糖含量高于野生，说明现有的栽培模式是可行的。
齿瓣石斛多糖含量较高，与传统评价方法中认为其富含黏液，品质较好相一致。但是，仅通过测定多糖含量不足以评价其品质，应借助现在广泛开展的指纹图谱研究技术，建立其与中药质量疗效的内在联系，尝试从不同角度关注齿瓣石斛的品质，确保其有效性和安全性。
【参考文献】 ［1］包雪声，顺庆生，陈立钻.中国药用石斛彩色图谱［M］.上海：上海医科大学出版社、复旦大学出版社，2001：87. ［2］郑志新，李 昆，张昌顺，等.云南龙陵齿瓣石斛化学成分分析测定及栽培方式选择［J］.安徽农业科学，2008，36（4）：1426. ［3］李满飞，徐国钧，平田义正，等.中药石斛类多糖的含量测定［J］.中草药，1990，21（10）：10.
